水产直通车 | 淡水养殖 | 虾类养殖 | 海水养殖 | 种苗技术 | 水产病害 | 水产饲料 | 加工出口 | 水产大全
观赏鱼养殖 | 黄鳝养殖 | 泥鳅养殖 | 龟鳖养殖 | 螃蟹养殖 | 对虾养殖 | 罗非养殖 | 海参养殖 | 金鲳养殖
当前位置:水产澳门太阳城官网网站 → 论文解读--诺卡氏菌通 今天是:2019年09月16日 星期一

论文解读--诺卡氏菌通过激活线粒体半胱天冬酶途径诱导牛乳腺上皮细胞凋亡

出处:水生动物健康评估公众号 作者:枫桥夜泊 水产养殖网 2019-08-26 15:02:00

据报道诺卡氏菌是人类和动物的细胞内病原体。诺卡氏菌可导致局部或全身性诺卡氏菌病,伴有脓或肉芽肿,可能通过吸入、摄入或创伤性植入传播,并可通过淋巴和血液循环传播。引起诺卡氏菌病的最重要物种包括奶牛乳腺炎诺卡氏菌、杀鲑诺卡氏菌、巴西诺卡氏菌、鼻疽诺卡氏菌和新星诺卡氏菌。
  
在人类中,诺卡氏菌病的常见表现为肺诺卡氏菌病、中枢神经系统(CNS)诺卡氏菌病、肺外诺卡氏菌病、皮肤、皮下或淋巴皮肤诺卡氏菌病和诺卡氏菌血症。在牛中,它与慢性鼻疽、流产、肺和全身性诺卡氏病有关。
  在许多细菌病原体中,线粒体依赖性凋亡途径被公认为主要的致病策略。在此过程中,凋亡因子打开线粒体通透性过渡孔,最终导致膜电位损失和细胞色素C活化。然后细胞色素C结合凋亡蛋白酶激活因子I(apaf-I),诱导寡聚。因此,apaf-1寡聚体与caspase-9的组装形成凋亡复合体。caspase-9随后通过caspase-3激活触发凋亡。然而,在BMEC中,capsase-9激活触发N.cyriacigeorgica细胞凋亡的具体机制尚不清楚。
  今天,与大家一起学习一篇关于诺卡氏菌对BMEC的细胞死亡效应的文章,文章信息如下:
按此在新窗口浏览图片

粘附和入侵实验
  细菌粘附和入侵被认为是感染过程中的重要致病和毒力因素,一些体内和体外实验表明,诺卡氏菌具有粘附和侵入各种类型细胞的能力,从而导致细胞和组织损伤。诺卡氏菌感染可诱导巨噬细胞和树突状细胞分化为泡沫细胞。此外,诺卡氏菌的入侵甚至可以导致噬菌体溶酶体融合的预防、蛋白酶体活性的抑制、抗氧化杀伤的抵抗、噬菌体酸化的阻塞以及巨噬细胞溶酶体酶活性的改变。

乳酸脱氢酶(LDH)释放实验
LDH是一种酶,通常存在于细胞质中,细菌感染后可通过受损细胞膜释放到细胞培养基中。低密度脂蛋白释放分析可用于评价环孢菌对BMEC的细胞病变作用。如图1所示,在感染1,3,6小时后测得有LDH的释放。但是在感染12和18小时后,LDH的释放与对照组相比,有显著的上升。这些结果表明随着时间的推移,N. cyriacigeorgica会对BMEC细胞膜造成严重的损伤。
按此在新窗口浏览图片

DNA片段化评估
作为凋亡细胞死亡的一个特征,DNA梯被应用于细胞凋亡的验证。DNA片段如图2所示。对照组、1、3、6h组和N.cyriacigeorgica对照组BMEC均未见DNA梯状带出现。但在感染组12和18小时,观察到明显的典型DNA梯状带。这些结果表明,N.cyriacigeorgica能诱导骨髓基质细胞凋亡/坏死,感染后12小时观察到凋亡DNA片段。
按此在新窗口浏览图片

细胞凋亡/坏死分析
 采用膜联蛋白v/pi双染色法分析早期凋亡细胞和晚期凋亡/坏死细胞。图3感染后1和3 h出现的局限性凋亡/坏死。感染后6h细胞早期凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。相对于对照组,感染后6 h细胞凋亡略有增加,感染后12 h和18 h细胞凋亡/坏死变化较感染前显著增加(P<0.01)。此外,12 h和18h时,晚期细胞凋亡/坏死率均比早期细胞凋亡率高(P<0.01)。此外,18 h(52.26%)总死亡率明显高于12h(46.99%)。这些数据表明,N.cyriacigeorgica能引起细胞凋亡和坏死,并呈时间依赖性增强。
按此在新窗口浏览图片

扫描电镜分析
为进一步证实bMECs感染N.cyriacigeorgica后的粘附性、侵袭性、LDH释放和细胞死亡,利用扫描电镜(SEM)检测了bMECs感染N.cyriacigeorgica后与细胞损伤的相互作用。对照组未见形态学改变(图4A)。感染后6 h,形态学改变为细胞表面部分bMECs和短诺卡菌丝轻度断裂(图4B,C)。在12和18 h感染后,bMECs明显收缩,细胞变态,脱皮,细胞膜破裂,与球形突出出现在某些细胞表面,丰富增长菌丝体覆盖细胞和纤维细胞膜渗透到细胞外和细胞内(图4 d I)。特别是在6、12或18 h,扫描电镜结果表明,细胞表面的微绒毛被诺卡氏菌属完全包裹纤维(图4 e、h I)。因此,这些细胞形态的变化表明,N.cyriacigeorgica的渗透和存活可能是上述细胞损伤的原因。
按此在新窗口浏览图片

透射电镜分析
用透射电镜(TEM)观察bMECs感染葡萄球菌后nocardial细胞的内化及超微结构的变化。感染细胞的超微结构变化如图5所示,包括感染后6 h内质网肿胀、嵴退变、线粒体肿胀、核周间隙扩张(图5D F);在12 h后感染,泡在细胞表面形成,细胞膜破裂,核膜,染色质凝集,碎片和着边染色质被发现(图5 g I)。最后,严重破坏的细胞,细胞器,线粒体内密集颗粒积累和观察,在18 h感染后(图5 j L)。此外,Nocardial细胞被发现在细胞质和细胞核。这些观察结果显示了由临床N. cyriacigeorgica感染引起的细胞逐渐坏死的过程。
按此在新窗口浏览图片

凋亡分析
前期(1 ~ 6 h)处于相对稳定的线粒体膜电位状态,nocardial感染晚期12 ~ 18 h,线粒体膜电位明显减少(p < 0.01),与对照组比较(见图6)。
按此在新窗口浏览图片
 
  细胞色素c、caspase-9和caspase-3的western blot结果如图7所示。感染后1 h线粒体细胞色素c释放逐渐增加(p<0.05),从1 h开始caspase-9的活化显著高于对照组(p< 0.01),感染后3 h caspase-3的活化显著高于对照组(p<0.05)。
按此在新窗口浏览图片

细胞内诺卡菌的生长表明,与对照组相比,12 h后细胞凋亡率明显增加(p < 0.01)(图8A,B)。12、18 h时,死亡细胞大多处于早期凋亡阶段(p<0.01)。此外,bMECs总死亡率18 h(19.70%)明显高于12 h (15.80%) (p < 0.01)。令人惊讶的是,革兰氏染色显示诺卡菌呈短棒状,在16小时内无明显生长;然而,它们在12和18 h时萌发成独特的长菌丝形式,导致感染细胞的病理形态学改变(图8C)。细菌计数结果表明,不同培养时间的诺卡菌总数与对照组相比无显著差异。类似的结果枚举的胞内诺卡氏菌属也发现在12 h。这是根据细胞凋亡分析,提出了细胞凋亡显著增加在12和18 h。细胞内细菌明显减少(p < 0.01)在18 h与对照组相比(图8 d)。革兰氏染色结果和诺卡菌数的不变表明,细胞内和细胞外N.cyriacigeorgica在18 h的孵育过程中都是由小棒向菌丝生长而不是繁殖(图8C,D)。在Nocardia生长旺盛的12、18 h,细胞凋亡明显加剧(图8A C)。
按此在新窗口浏览图片

结语
这些结果表明临床N.cyriacigeorgica能够粘附和侵入bMEC,导致细胞膜破坏和线粒体变性。文章的数据支持这样的假设:N.cyriacigeorgica通过细胞凋亡机制诱导宿主细胞死亡,并且N.cyriacigeorgica感染的后期在bMECs中遵循线粒体依赖性凋亡途径。这些研究结果表明,bMECs的细胞凋亡是通过触发caspase级联诱导的,并可能对牛乳腺组织中N.cyriacigeorgica感染的机制提供重要的见解。

(本文已被浏览 2773 次)
发布人:webmaster
→ 推荐给我的好友
上篇文章:鱼病知识--流行病学调查
下篇文章:这些可能被忽视的因素,正在影响你的南美白对虾吃料
〖文章打印〗
〖关闭窗口〗


  文章分类
价格直通车 |
龙虾行情  黄鳝行情  泥鳅行情  大闸蟹行情  白对虾行情  乌龟甲鱼行情  淡水鱼综合行情 
黑鱼行情  鳜鱼行情  海参行情  罗非鱼行情  黄颡鱼行情  加州鲈鱼行情  水产品综合行情 
牛蛙行情  鲶鱼行情  海鲈行情  多宝鱼行情  石斑鱼行情 
淡水养殖 |
黄鳝养殖  泥鳅养殖  螃蟹养殖  甲鱼养殖  罗非鱼养殖  笋壳鱼养殖  花鲢白鲢养殖 
鮰鱼养殖  鳗鱼养殖  草鱼养殖  黑鱼养殖  娃娃鱼养殖  冷水鱼养殖  水产养殖百科 
鳜鱼养殖  鲟鱼养殖  鲶鱼养殖  水蛭养殖  加州鲈养殖  黄颡鱼养殖  特种水产养殖 
青鱼养殖  鲤鱼养殖  鳊鱼养殖  青蛙养殖  长吻鮠养殖  虹鳟鱼养殖  水质调节技术 
鲫鱼养殖  乌龟养殖  牛蛙养殖  白鱼养殖  河豚鱼养殖  胭脂鱼养殖  淡水白鲳养殖 
虾类专题 |
青虾养殖  小龙虾养殖  基围虾养殖  罗氏沼虾养殖  斑节对虾养殖  南美白对虾养殖 
海水养殖 |
海水养殖  石斑鱼养殖  海参养殖  鲷鱼养殖  鲳鱼养殖  鲍鱼养殖  多宝鱼养殖 
贝类养殖  梭子蟹养殖  青蟹养殖  黄鱼养殖  海蜇养殖  扇贝养殖  海鲈鱼养殖 
种苗技术 |
苗种培育  淡水鱼育苗 
水产病害 |
水产综合病害  淡水鱼病  淡水虾蟹病  鱼病图谱  海水鱼病  乌龟甲鱼病害  海水虾蟹病 
海水贝类病害  育珠蚌病  鲍鱼海参病 
观赏鱼养殖 |
锦鲤专区  龙鱼专区  金鱼专区  神仙鱼专区  罗汉鱼专区  孔雀鱼专区  观赏鱼综合 
水产饲料 |
饲料知识  饲料加工  饲料原料  饲料配方 
加工出口 |
水产加工  水产出口 
水产渔药 |
渔药百科  渔药使用  渔药原料 
水产大全 |
营养美食  致富经  水产展会  水产人物  养殖基地  水产百科 
水产设备 |
水产养殖设备  水产加工设备  水产饲料设备 

  相关文库:
  水温降低,这个破坏力很强的病害又要
  【病害预防】自来水不宜直接养鱼?主
  死亡率高达95%的纤毛虫病,先搞清
  鱼病知识--流行病学调查
  论文解读--不同生长周期星状诺卡氏
  鱼虾蟹的疾病是吃出来的吗?
  鱼病知识--人畜共患菌之弓形杆菌
  鱼病知识--细胞肿大虹彩病毒简介
  鱼病知识--美人鱼发光杆菌
  鱼塘漂起来的鱼是什么时候死的,实验

  相关澳门太阳城官网网址:
  广东肇庆市2019年9月水产养殖病
  云南玉溪市江川区积极开展抗浪鱼鱼病
  上海市2019年9月水产养殖病害预
  2019年9月份贵州水产养殖病害预
  福建省莆田市2019年9月水产养殖
  江苏省扬州市宝应县:9月水产养殖病
  关于公布鲤浮肿病等4种疫病病原实验
  江苏省高邮市水产养殖病害预报 第(20
  福建省厦门市海洋与渔业研究所举办对
  2019年9月份山东省水产养殖病害

  文章链接
   推荐文章
   热门文章

客服热线:025-68672105 13813881966 合作:13451922207 技术:18169807355
客服:点击这里给我发消息 合作:点击这里给我发消息
地址:南京汉中路185号4F 邮编:210029

E-mail:web@tecnologiaesistemi.com关于我们联系我们广告服务

苏ICP备05000971号 苏B2-20140403

Copyright 2006-2016 南京问商网络科技有限公司

水产养殖网微信
扫一扫加入水产养殖网微信